Серьезной проблемой для производства биопрепаратов в ветеринарной и биофармакологической промышленности, а также для научно-исследовательских лабораторий является загрязнение микоплазменной инфекцией. Ряд трудностей связан с обнаружением и деконтаминацией микоплазмы из-за ее высокой резистентности к антибиотикам и латентным характером протекания микоплазменной инфекции. Разработка эффективных способов своевременного выявления микоплазм и деконтаминации вирусных штаммов, пассируемых в клеточных культурах, является актуальной задачей. Целью работы являлась оценка возможности деконтаминации вирусов от микоплазменного загрязнения с использованием антибиотиков. В работе использовали коллекцию штаммов ортохантавирусов (ФНЦИРИП имени М. П. Чумакова РАН) вирус Пуумала, Хантаан, вирус Сочи – геновариант вируса Добрава/Белград. Для индикации микоплазмы применяли цитохимический метод с использованием красителя Hoechst 33258. Размножение вируса контролировали непрямым методом флюореcцирующих антител, титр вируса в клетке определяли методом фокуcобразующих единиц. В работе представлены данные по микоплазменной деконтаминации штаммов ортохантавирусов с использованием антибиотиков ципрофлоксацина и BMCyclin (Roche). Показано, что ципрофлоксацин обладает явным цитотоксическим эффектом, а применение BMCyclin может приводить к подавлению репликации вируса в клетке. Предложен способ применения BMCyclin для ортохантавируса Хантаан, обеспечивающий хорошую выживаемость клеточной культуры Vero E6 и высокую степень репродукции вируса. Показана высокая эффективность антибиотика ВМСyclin для деконтаминации микоплазмы, его использование является простым, эффективным и малозатратным и может быть рекомендовано с целью сохранения ценных вирусных штаммов.
Mycoplasma contamination is a serious problem for the production of biologics in the veterinary and biopharmacological industries, as well as for research laboratories. A number of dificulties are associated with the detection and decontamination of mycoplasma due to its high resistance to antibiotics and the latent nature of the course of mycoplasma infection. The development of effective methods for the timely detection of mycoplasmas and the decontamination of viral strains passaged in cell cultures is an urgent task. The aim of this work was to assess the possibility of decontamination of viruses from mycoplasma contamination using antibiotics. We used a collection of strains of orthohantaviruses (FSCIRIP named after M. P. Chumakov RAS) Puumala virus, Hantaan virus, Sochi virus - a genovariant of the Dobrava/Belgrade virus. A cytochemical method using Hoechst 33258 dye was used to indicate Mycoplasma. Virus reproduction was controlled by indirect method of fluorescent antibodies, the virus titer in the cell was determined by the method of focus-forming units. This paper presents data on Mycoplasma decontamination of orthohantavirus strains using the antibiotics ciprofloxacin and BMCyclin (Roche). It has been shown that ciprofloxacin has a clear cytotoxic effect, and the use of BMCyclin can lead to suppression of virus replication in the cell. A method of using BMCyclin for Hantaan orthohantavirus is proposed, which provides good survival of Vero E6 cell culture and a high degree of virus reproduction. The high eficiency of the antibiotic BMCyclin for decontamination of Mycoplasma has been shown. Its use is simple, effective and low-cost and can be recommended in order to preserve valuable viral strains.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.