Целью исследования явилось конструирование антигенного латексного диагностикума для индикации лептоспирозных антител. Авторами получен высокоактивный антиген; отработан режим иммобилизации антигена на латексе; оптимизированы условия проведения реакции суспензионной агглютинации (РСА); проведены лабораторные испытания препарата. Для получения антигенных комплексов использованы штаммы лептоспир шести серогрупп. Выделение антигенов проводили по схеме, включающей Х-пресс и ультразвуковую дезинтеграцию с последующей экстракцией неионным детергентом. В результате получены антигены с высокой концентрацией белка - 12-15 мг/мл. Специфическая активность в реакции иммунодиффузии (РИД) для различных серогрупп лептоспир колебалась от 1:32 до 1:64. Изучены структурные характеристики полиакролеиновой матрицы: удельная поверхность матрицы равна 35 м2/г, объем пор - 1,1 см3/г, радиус пор - 62,8 нм. Проведена иммобилизация латексных частиц полигрупповым антигеном и подобраны оптимальные условия сенсибилизации. Влияние концентрации лиганда и рН реакционной смеси изучали в РСА. В качестве источника антител применяли смесь коммерческих агглютинирующих сывороток кролика против лептоспир 6 серогрупп. Усовершенствованы условия постановки РСА путем использования разводящей жидкости, обеспечивающей максимальную чувствительность и демонстративность реакции. Оптимальное значение рН реакционной смеси составило 7,0-7,5. Сенсибилизирующая доза антигена - 180 мкг/мл. Результаты исследования показали, что по чувствительности родоспецифический суспензионный лептоспирозный диагностикум превосходит чувствительность стандартного метода - реакции микроагглютинации (РМА) в среднем в 1,7 раза, при использовании препарата не требуется использование живых культур лептоспир. Это свидетельствует о возможности применения диагностикума в широкой медицинской и ветеринарной практике в качестве скрининг-теста на лептоспироз.
The aim of the study was to design an antigen latex diagnostic test to indicate Leptospira antibodies. The authors have obtained the highly active antigen; regime of immobilization of the antigen to the latex. Conditions of slurry agglutination reaction was optimized and laboratory tests of the drug was conducted. For antigenic complexes used six strains of Leptospira serogroups. Antigens were isolated by the scheme comprising X-press and an ultrasonic disintegration with followed by extraction with a non-ionic detergent. In the result was obtained by protein antigens with high concentration (12- 15 mg / ml). The specific activity in the immunodiffusion reaction for different serogroups of Leptospira ranged from 1:32 to 1:64. The structural characteristics of polyacrolein matrix was shown. The specific surface area of the matrix was 35 m2 / g, pore volume was 1.1 cm3 / g, pore radius was 62.8 nm. Immobilization latex particles by polyantigenic was performed. Optimal conditions for sensitization were chosen. Influence of ligand concentration and pH of the reaction mixture was studied in the test suspension agglutination. The source of the antibodies was a mixture of commercial agglutinating rabbit sera against Leptospira serogroups 6. Conditions for suspension agglutination test Improved using a dilution fluid, which provides maximum sensitivity reaction. Optimum reaction pH was 7.0- 7.5. Sensitizing antigen dose was 180 mg / ml. The results showed that the sensitivity of the suspension Leptospira Diagnosticum above standard method in 1.7 times. When using the drug does not require the use of live cultures of Leptospira. This suggests the possibility of using diagnostic kit in human and veterinary medicine as a screening test for leptospirosis.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.