vetpatolВетеринарная патологияRussian Journal of Veterinary Pathology2949-4826Don State Technical University10.25690/VETPAT.2021.31.40.007vetpatol-56Research ArticleИСТОРИЯ ВЕТЕРИНАРИИHISTORY OF VETERINARY MEDICINEПРИМЕНЕНИЕ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ РАБИЧЕСКОГО АНТИГЕНА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕAPPLICATION OF DOT-IMMUNOASSAY FOR INDICATION OF RABIES ANTIGEN IN PATHOLOGICAL MATERIALАхмадеевР. М.AkhmadeevR. M.noemail@neicon.ruАрслановаА. Ф.ArslanovaA. F.a.f.avzalova@yandex.ruМифтаховН. Р.MiftahovN. R.noemail@neicon.ruНасыровШ. М.NasirovS. M.noemail@neicon.ruЕфимоваМ. А.EfimovaM. A.noemail@neicon.ruСамерхановИ. И.SamerkhanovI. I.noemail@neicon.ruФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»РоссияFSBSI «Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety» «FCTRBS-ARRVI»Russian Federation202120062021022125Copyright © Ахмадеев Р.М., Арсланова А.Ф., Мифтахов Н.Р., Насыров Ш.М., Ефимова М.А., Самерханов И.И., 20212021Ахмадеев Р.М., Арсланова А.Ф., Мифтахов Н.Р., Насыров Ш.М., Ефимова М.А., Самерханов И.И.Akhmadeev R.M., Arslanova A.F., Miftahov N.R., Nasirov S.M., Efimova M.A., Samerkhanov I.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vetpat.ru/jour/article/view/56

The aim of the research was to develop a protocol for an indirect dot-immunoassay on a nitrocellulose membrane (NCM) for the qualitative determination of the presence of rabies virus antigen in pathological material. As the test samples, we used brain samples of various animal species (foxes and mice), which were positive during the initial study by the methods of fuorescent antibodies and bioassays. Te setting of the immunofuorescence reaction was carried out according to GOST 26075-13 with some modifcations. Immunofuorescence reaction and indirect «sandwich» ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) were carried out using diagnostic kits manufactured at the FSBSI «FCTRBS- ARRVI»(Kazan). Te materials present the results of primary laboratory tests of the test system for the indication of rabies antigen based on the indirect dot-immunoassay of 81 samples of pathological material from the brain of various animal species. It was shown that indirect dot-immunoassay has 100 % specifcity and a sensitivity of at least 96.3 %, and its optical signals correlate with the results of indirect ELISA. Te proposed indirect dot-immunoassay method, in addition to independent use, can also serve as a basis for the design of test systems based on immunochemical analysis.

антигенбешенстводот-иммуноанализпатологический материалиммуноферментный анализчувствительностьспецифичностьantigenrabiesdot-immunoassaypathological materialenzyme-linked immunosorbent assaysensitivityspecif cityReferencesMahadevan A. Perspectives in Diagnosis and Treatment of Rabies Viral Encephalitis / A. Mahadevan, M. S. Suja, R. S. Mani, S. K. Shankar // Insights from Pathogenesis. Neurotherapeutics. - 2016. - 13 (3), 477-92. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1007/s13311-016-0452-4Mahadevan A. Perspectives in Diagnosis and Treatment of Rabies Viral Encephalitis / A. Mahadevan, M. S. Suja, R. S. Mani, S. K. Shankar // Insights from Pathogenesis. Neurotherapeutics. - 2016. - 13 (3), 477-92. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1007/s13311-016-0452-4Lйchenne M. Validation of a Rapid Rabies Diagnostic Tool for Field Surveillance in Developing Countries / M. Lйchenne, K. Naпssengar, A. Lepelletier, I. O. Alfaroukh, H. Bourhy // PLoS Negl Trop Dis. - 2016. - 10 (10): e0005010. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.1371/journal. pntd.0005010Lйchenne M. Validation of a Rapid Rabies Diagnostic Tool for Field Surveillance in Developing Countries / M. Lйchenne, K. Naпssengar, A. Lepelletier, I. O. Alfaroukh, H. Bourhy // PLoS Negl Trop Dis. - 2016. - 10 (10): e0005010. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.1371/journal. pntd.0005010Smith J. Case report: Rapid ante-mortem diagnosis of a human case of rabies imported into the UK from the Philippines / J. Smith, L. McElhinney, G. Parsons, N. Brink [et al.] // J. Med. Virol. - 2003. - 69 (1). - P. 150-155. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1002/jmv.10253Smith J. Case report: Rapid ante-mortem diagnosis of a human case of rabies imported into the UK from the Philippines / J. Smith, L. McElhinney, G. Parsons, N. Brink [et al.] // J. Med. Virol. - 2003. - 69 (1). - P. 150-155. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1002/jmv.10253Chacko K. Diagnostic difficulties in human rabies: A case report and review of the literature / K. Chacko, R. T. Parakadavathu, M. Al-Maslamani, P. A. Nair [et al.] // Qatar Med. J. - 2016. - (2):15. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.5339/ qmj.2016.15Chacko K. Diagnostic difficulties in human rabies: A case report and review of the literature / K. Chacko, R. T. Parakadavathu, M. Al-Maslamani, P. A. Nair [et al.] // Qatar Med. J. - 2016. - (2):15. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.5339/ qmj.2016.15Larghi O. Methods for accelerating the fluorescentantibody test for rabies diagnosis / O. Larghi, E. Jimenez // Appl Microbiol. - 1971. - 21 (4). - P. 611- 614Larghi O. Methods for accelerating the fluorescentantibody test for rabies diagnosis / O. Larghi, E. Jimenez // Appl Microbiol. - 1971. - 21 (4). - P. 611- 614Realegeno S. An ELISA-based method for detection of rabies virus nucleoprotein-specific antibodies in human antemortem samples / S. Realegeno, M. Niezgoda, P. A. Yager, A. Kumar [et al.] // PLoS One. - 2018. - 13 (11): e0207009. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.1371/ journal. pone.0207009Realegeno S. An ELISA-based method for detection of rabies virus nucleoprotein-specific antibodies in human antemortem samples / S. Realegeno, M. Niezgoda, P. A. Yager, A. Kumar [et al.] // PLoS One. - 2018. - 13 (11): e0207009. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.1371/ journal. pone.0207009Webster W. A. The mouse inoculation test in rabies diagnosis: early diagnosis in mice during the incubation period / W. A. Webster, G. A. Casey, K. M. Charlton // Can. J. Comp. Med. - 1976. - 40 (3). - P. 322-325Webster W. A. The mouse inoculation test in rabies diagnosis: early diagnosis in mice during the incubation period / W. A. Webster, G. A. Casey, K. M. Charlton // Can. J. Comp. Med. - 1976. - 40 (3). - P. 322-325Hamir A. N. Immunoperoxidase test for rabies: utility as a diagnostic test / A. N. Hamir, S. Moser // J. Vet. Diagn. Invest. - 1994. - 6 (2). - P. 148- 200. - Режим доступа к журналу: https://doi.org /10.1177/104063879400600203Hamir A. N. Immunoperoxidase test for rabies: utility as a diagnostic test / A. N. Hamir, S. Moser // J. Vet. Diagn. Invest. - 1994. - 6 (2). - P. 148- 200. - Режим доступа к журналу: https://doi.org /10.1177/104063879400600203Недосеков В. В. Сравнительная оценка методов лабораторной диагностики бешенства / В. В. Не досеков // Ветеринарная патология. - 2002. - № 1. - С. 41-47Недосеков В. В. Сравнительная оценка методов лабораторной диагностики бешенства / В. В. Не досеков // Ветеринарная патология. - 2002. - № 1. - С. 41-47Sumi S. Assessment of four recombinant mycobacterial antigens as serodiagnostic markers for pulmonary tuberculosis / S. Sumi, G. K. Madhavilatha, S. Mundayoor, A. Mathai, V. V. Radhakrishnan // Journal of Clinical Medicine and Research. - 2009. - № 1 (3). - P. 35-40. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.5897/ JCMR.9000012Sumi S. Assessment of four recombinant mycobacterial antigens as serodiagnostic markers for pulmonary tuberculosis / S. Sumi, G. K. Madhavilatha, S. Mundayoor, A. Mathai, V. V. Radhakrishnan // Journal of Clinical Medicine and Research. - 2009. - № 1 (3). - P. 35-40. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.5897/ JCMR.9000012Storey C. C. Immune dot blot technique for diagnosing infection with Chlamydia trachomatis / C. C. Storey, G. Mearns, S. J. Richmond // Genitourinary Medicine. - 1987. - № 63 (6). - P. 375-379. - Режим доступа к журналу: https://doi. org /10.1136/sti.63.6.375Storey C. C. Immune dot blot technique for diagnosing infection with Chlamydia trachomatis / C. C. Storey, G. Mearns, S. J. Richmond // Genitourinary Medicine. - 1987. - № 63 (6). - P. 375-379. - Режим доступа к журналу: https://doi. org /10.1136/sti.63.6.375Gentilomi G. Dot immunoperoxidase assay for detection of parvovirus B19 antigens in serum samples / G. Gentilomi, M. Musiani, M. Zerbini, G. Gallinella [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1997. - № 35 (6). - P. 1575-1578Gentilomi G. Dot immunoperoxidase assay for detection of parvovirus B19 antigens in serum samples / G. Gentilomi, M. Musiani, M. Zerbini, G. Gallinella [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1997. - № 35 (6). - P. 1575-1578Reina J. Evaluation of a new dot blot enzyme immunoassay (directigen flu A+B) for simultaneous and differential detection of influenza a and B virus antigens from respiratory samples / J Reina, E. Padilla, F. Alonso, E. R. De Gopegui [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2002. - № 40 (9):3515-7. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.1128/ jcm.40.9.3515-3517.2002Reina J. Evaluation of a new dot blot enzyme immunoassay (directigen flu A+B) for simultaneous and differential detection of influenza a and B virus antigens from respiratory samples / J Reina, E. Padilla, F. Alonso, E. R. De Gopegui [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2002. - № 40 (9):3515-7. - Ре жим доступа к журналу: https://doi.org/10.1128/ jcm.40.9.3515-3517.2002Falconar A. K. I. A simple, inexpensive, robust and sensitive dot-blot assay for equal detection of the nonstructural-1 glycoprotein of all dengue virus serotypes / A. K. I. Falconar, C. M. E. Romero-Vivas // Virol. J. - 2013. - № 10:126. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.1186/1743-422X-10-126Falconar A. K. I. A simple, inexpensive, robust and sensitive dot-blot assay for equal detection of the nonstructural-1 glycoprotein of all dengue virus serotypes / A. K. I. Falconar, C. M. E. Romero-Vivas // Virol. J. - 2013. - № 10:126. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/10.1186/1743-422X-10-126Oprandy J. J. Evaluation of performance parameters of a membrane-based dot immunoassay for meningococcal polysaccharide / J. J. Oprandy, J. E. Sippel // J Clin Microbiol. - 1989. - № 27 (1):74- 7. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1128/JCM.27.1.74-77.1989Oprandy J. J. Evaluation of performance parameters of a membrane-based dot immunoassay for meningococcal polysaccharide / J. J. Oprandy, J. E. Sippel // J Clin Microbiol. - 1989. - № 27 (1):74- 7. - Режим доступа к журналу: https://doi.org/ 10.1128/JCM.27.1.74-77.1989Nadala C. Dot-blot nitrocellulose enzyme immunoassays for the detection of white-spot virus and yellow-head virus of penaeid shrimp / C. Nadala, P. C. Loh // Journal of Virological Methods. - 2000. - № 84 (2):175-9. - Режим доступа к журна лу: https://doi.org/10.1016/ S0166-0934(99)00140-8Nadala C. Dot-blot nitrocellulose enzyme immunoassays for the detection of white-spot virus and yellow-head virus of penaeid shrimp / C. Nadala, P. C. Loh // Journal of Virological Methods. - 2000. - № 84 (2):175-9. - Режим доступа к журна лу: https://doi.org/10.1016/ S0166-0934(99)00140-8Madhusudana S. N. Rapid diagnosis of rabies in humans and animals by a dot blot enzyme immunoassay / S. N. Madhusudana, J. P. V. Paul, V. K. Abhilash, M. S. Suja // Int. J. Infect. Dis. - 2004. - № 8 (6):339-45. - Режим доступа: https://doi. org/10.1016/ j.ijid.2004. 02.006Madhusudana S. N. Rapid diagnosis of rabies in humans and animals by a dot blot enzyme immunoassay / S. N. Madhusudana, J. P. V. Paul, V. K. Abhilash, M. S. Suja // Int. J. Infect. Dis. - 2004. - № 8 (6):339-45. - Режим доступа: https://doi. org/10.1016/ j.ijid.2004. 02.006Jahn R. A quantitative dot-immunobinding assay for proteins using nitrocellulose membrane filters / R. Jahn, W. Schiebler, P. Greengard // Proc. Natl. Acad. Sci. - USA. - 1983. - No. 81. - P. 1684-1687Jahn R. A quantitative dot-immunobinding assay for proteins using nitrocellulose membrane filters / R. Jahn, W. Schiebler, P. Greengard // Proc. Natl. Acad. Sci. - USA. - 1983. - No. 81. - P. 1684-1687Tian G. Quantitative dot blot analysis (QDB), a versatile high throughputimmunoblot method / G. Tian, F. Tang, C. Yang // Oncotarget, Advance Publications. - 2017. - No. 8 (35). - Режим досту па к журналу: https://doi.org/10.18632/ oncotarget. 17236Tian G. Quantitative dot blot analysis (QDB), a versatile high throughputimmunoblot method / G. Tian, F. Tang, C. Yang // Oncotarget, Advance Publications. - 2017. - No. 8 (35). - Режим досту па к журналу: https://doi.org/10.18632/ oncotarget. 17236Шарапова Н. А. Выделение гликопротеида из фиксированного штамма вируса бешенства штамма «Москва 2532» и конструирование на его основе диагностикума для дот-иммуноанализа / Н. А. Шарапова, М. Н. Киреев, Е. Г. Абрамова и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - № 5 (87). - Т. 1. - С. 347-350Шарапова Н. А. Выделение гликопротеида из фиксированного штамма вируса бешенства штамма «Москва 2532» и конструирование на его основе диагностикума для дот-иммуноанализа / Н. А. Шарапова, М. Н. Киреев, Е. Г. Абрамова и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - № 5 (87). - Т. 1. - С. 347-350Nadyrova A. I. Obtaining rabies virus purified antigen / A. I. Nadyrova, M. A. Efimova, A. G. Mukhamedzhanova [et al.] // Asian Journal of Pharmaceutics. - 2018. - № 12 (4). - P. 1299-1303Nadyrova A. I. Obtaining rabies virus purified antigen / A. I. Nadyrova, M. A. Efimova, A. G. Mukhamedzhanova [et al.] // Asian Journal of Pharmaceutics. - 2018. - № 12 (4). - P. 1299-1303Пат. 2694836 Российская Федерация, МПК7 А61К 39/205, А61Р 31/12. Способ получения антигена вируса бешенства для серологиче ской диагностики / Ахмадеев Р. М., Ефимова М. А., Чернов А. Н. и др., заявитель и патенто обладатель ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». - № 2018144597. заявл. 14.12.18, опубл. 17.07.19Пат. 2694836 Российская Федерация, МПК7 А61К 39/205, А61Р 31/12. Способ получения антигена вируса бешенства для серологиче ской диагностики / Ахмадеев Р. М., Ефимова М. А., Чернов А. Н. и др., заявитель и патенто обладатель ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». - № 2018144597. заявл. 14.12.18, опубл. 17.07.19Takagi J. Semi-Quantitative Measurement of Proteins by Dot Blotting. 2000Takagi J. Semi-Quantitative Measurement of Proteins by Dot Blotting. 2000Мухамеджанова А. Г. Оптимизация схем гипе риммунизации лабораторных животных высо коочищенным антигеном вируса бешенства / А. Г. Мухамеджанова, Р. М. Ахмадеев, Н. Р. Мифта хов, Ш. М. Насыров и др. // Ветеринария. - 2020. - № 10. - С. 25-29Мухамеджанова А. Г. Оптимизация схем гипе риммунизации лабораторных животных высо коочищенным антигеном вируса бешенства / А. Г. Мухамеджанова, Р. М. Ахмадеев, Н. Р. Мифта хов, Ш. М. Насыров и др. // Ветеринария. - 2020. - № 10. - С. 25-29Ефимова М. А. Оценка пригодности выделен ных антирабических иммуноглобулинов для ме тодов лабораторной диагностики: ИФА и МФА / М. А. Ефимова, А. Г. Мухамеджанова, А. Н. Чернов и др. // Ветеринарный врач. - 2018. - № 4. - С. 3-7Ефимова М. А. Оценка пригодности выделен ных антирабических иммуноглобулинов для ме тодов лабораторной диагностики: ИФА и МФА / М. А. Ефимова, А. Г. Мухамеджанова, А. Н. Чернов и др. // Ветеринарный врач. - 2018. - № 4. - С. 3-7

The authors declare that there are no conflicts of interest present.