ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР: РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ ОСНОВАННЫХ НА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ ПРОДУКТА В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ (ПЦР-РВ)
Аннотация
Одной из основных задач при длительном культивировании клеток является периодическая оцен-
ка их видовой принадлежности. Нами разработан новый подход к идентификации клеточных линий
следующих видов: Ovis aries (овца), Bos taurus (корова) and Sus scrofa (свинья). Метод основан на
полимеразной цепной реакции с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени
(ПЦР-РВ). Для видовой идентификации в качестве мишени выбраны последовательности митохон-
дриальной ДНК, кодирущие цитохром b и субъединицу I цитохром с-оксидазы. Валидированы прай-
меры и зонды, позволяющие добиться специфичности ПЦР. Высокая чувствительность метода поз-
воляет надежно выявлять единичные клетки постороннего вида в смеси с значительно большим ко-
личеством (порядка сотен тысяч) клеток другого вида. С помощью данного метода идентифициро-
вана видовая принадлежность 8 культур клеток и 17 сублиний. Метод является предпочтительным
по сравнению с используемыми в настоящее время кариологическим и изоферментным анализами и
традиционной видоспецифической ПЦР и электрофоретической детекцией продуктов.
ка их видовой принадлежности. Нами разработан новый подход к идентификации клеточных линий
следующих видов: Ovis aries (овца), Bos taurus (корова) and Sus scrofa (свинья). Метод основан на
полимеразной цепной реакции с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени
(ПЦР-РВ). Для видовой идентификации в качестве мишени выбраны последовательности митохон-
дриальной ДНК, кодирущие цитохром b и субъединицу I цитохром с-оксидазы. Валидированы прай-
меры и зонды, позволяющие добиться специфичности ПЦР. Высокая чувствительность метода поз-
воляет надежно выявлять единичные клетки постороннего вида в смеси с значительно большим ко-
личеством (порядка сотен тысяч) клеток другого вида. С помощью данного метода идентифициро-
вана видовая принадлежность 8 культур клеток и 17 сублиний. Метод является предпочтительным
по сравнению с используемыми в настоящее время кариологическим и изоферментным анализами и
традиционной видоспецифической ПЦР и электрофоретической детекцией продуктов.
Об авторе
К. В. Кулешов
ВНИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко РАСХН (ВИЭВ),
Москва (Россия) лаборатория клеточной биотехнологии
Россия
Россия
Список литературы
1. Дьяконов Л.П., Ситьков В.И. (ред.). Животная клетка в культуре. М.: Спутник+, 2000, 400 с., илл.
2. Altschul SF, Madden TL, Schaeffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipma DJ (1997) Gapped BLAST and PSI BLAST:a new generation of protein database search programs. Nuc Acid Res 25:3389-3402
3. Clausen J.J. Comparative chromosomal study of 31 cultured mammalian cell lines [Text]/ Clausen J.J., Syverton J.T. // J Natl Cancer Inst. 1962. Vol. 28. P. 117-45.
4. Cooper J. Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach [Text]/ Cooper J.. [et al.] // In Vitro Cellular & Developmental Biology Animal. 2007. Vol. 43. № 10. P. 344-351.
5. Coriell L.L. Common antigens in tissue culture cell lines [Text]/ Coriell L.L., Tall M.G., Gaskill H. // Science. 1958. Vol. 128. № 3317. P. 198-9.
6. Defendi V. Immunological and karyological criteria for identification of cell lines [Text]/ Defendi V., Billingham R.E., Silvers W.K., Moorhead P. // J Natl Cancer Inst. 1960. Vol. 25. P. 359-85.
7. Gartler S.M. Apparent Hela cell contamination of human heteroploid cell lines [Text]/ Gartler S.M. // Nature. 1968. Vol. 217. № 5130. P. 750-1.
8. Hay R.J. Methods for authenticating cell lines [Text]/ Hay R.J. // Dev Biol Stand. 1992. Vol. 76. -. - P. 25-37.
9. Liu M. Rapid identification and authentication of closely related animal cell culture by polymerase chain reaction [Text]/ Liu M., Liu H., Tang X., Vafai A. // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2008. Vol. 44. № 7. P. 224-227.
10. Losi C. An alternative method to isoenzyme profile for cell line identification and interspecies crosscontaminations: cytochrome b PCR-RLFP analysis [Text]/ Losi C., Ferrari S., Sossi E., Villa R., Ferrari M. // In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 2008.
11. Milanesi E. Molecular detection of cell line crosscontaminations using amplified fragment length polymorphism DNA fingerprinting technology [Text]/ Milanesi E.. [et al.] // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2003.Vol. 39. № 3-4. P. 124-30.
12. Ono K. Species identification of animal cells by nested PCR targeted to mitochondrial DNA [Text]/ Ono K.. [et al.] // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2007. Vol. 43. № 5-6. P. 168-75.
13. Parodi B. Species identification and confirmation of human and animal cell lines: a PCR-based method [Text]/ Parodi B.. [et al.] // Biotechniques. 2002. Vol. 32. № 2. P. 432-4, 436, 438-40.
14. Robin E.D. Mitochondrial DNA molecules and virtual number of mitochondria per cell in mammalian cells [Text]/ Robin E.D., Wong R. // J Cell Physiol. 1988. Vol. 136. № 3. P. 507-13.
15. Simpson W.F. Species Identification of Animal Cell Strains by Immunofluorescence [Text]/ Simpson W.F., Stulberg C.S. // Nature. 1963. Vol. 199. P. 616-7.
16. Stacey G.N. DNA fingerprinting transforms the art of cell authentication [Text]/ Stacey G.N., Bolton B.J., Doyle A. // Nature. 1992. Vol. 357. № 6375. P. 261-2.
17. Steube K. Identification and verification of rodent cell lines by polymerase chain reaction [Text]/ Steube K., Koelz A.-L., Drexler H. // Cytotehnology. 2008. Vol. 56. № 1. P.49-56.
18. Steube K.G. A simple method using beta-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines-a progress report [Text]/ Steube K.G., Meyer C., Uphoff C.C., Drexler H.G. // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2003. Vol. 39. № 10. P. 468-75.
19. Tsareva A.A.Isoenzyme characteristics of glucose- 6-phosphage dehydrogenase and lactate dehydrogenase of continuous cells from the collection of the Sverdlovsk Research Institute of Virus Infections [Text]/ Tsareva A.A., Glinskikh N.P., Dreizin R.S., Kolesnikova G.G., Zhdanov V.M. // Vopr Virusol. 1976. № 5. P. 620-3.
20. Molecular cloning : a laboratory manual / Sambrook, Joseph; Russell, David W. 3rd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory, 2001.
Рецензия
Для цитирования:
Кулешов К.В. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР: РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ ОСНОВАННЫХ НА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ ПРОДУКТА В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ (ПЦР-РВ). Ветеринарная патология. 2008;(3):40-45.
Просмотров:
55
Послать статью по эл. почте 