СУСПЕНЗИОННЫЙ АНТИГЕННЫЙ ЛЕПТОСПИРОЗНЫЙ ДИАГНОСТИКУМ

Целью исследования явилось конструирование антигенного латексного диагностикума для индикации лептоспирозных антител. Авторами получен высокоактивный антиген; отработан режим иммобилизации антигена на латексе; оптимизированы условия проведения реакции суспензионной агглютинации (РСА); проведены лабораторные испытания препарата. Для получения антигенных комплексов использованы штаммы лептоспир шести серогрупп. Выделение антигенов проводили по схеме, включающей Х-пресс и ультразвуковую дезинтеграцию с последующей экстракцией неионным детергентом. В результате получены антигены с высокой концентрацией белка - 12-15 мг/мл. Специфическая активность в реакции иммунодиффузии (РИД) для различных серогрупп лептоспир колебалась от 1:32 до 1:64. Изучены структурные характеристики полиакролеиновой матрицы: удельная поверхность матрицы равна 35 м2/г, объем пор - 1,1 см3/г, радиус пор - 62,8 нм. Проведена иммобилизация латексных частиц полигрупповым антигеном и подобраны оптимальные условия сенсибилизации. Влияние концентрации лиганда и рН реакционной смеси изучали в РСА. В качестве источника антител применяли смесь коммерческих агглютинирующих сывороток кролика против лептоспир 6 серогрупп. Усовершенствованы условия постановки РСА путем использования разводящей жидкости, обеспечивающей максимальную чувствительность и демонстративность реакции. Оптимальное значение рН реакционной смеси составило 7,0-7,5. Сенсибилизирующая доза антигена - 180 мкг/мл. Результаты исследования показали, что по чувствительности родоспецифический суспензионный лептоспирозный диагностикум превосходит чувствительность стандартного метода - реакции микроагглютинации (РМА) в среднем в 1,7 раза, при использовании препарата не требуется использование живых культур лептоспир. Это свидетельствует о возможности применения диагностикума в широкой медицинской и ветеринарной практике в качестве скрининг-теста на лептоспироз.

лептоспироз, антиген, антитело, агглютинация, РМА, РИД, РСА, латекс, полиакролеин, матрица, диагностикум, чувствительность

1. Ананьин В.В. Лептоспирозы людей и животных / В.В. Ананьин, И.Л. Коковин, Е.В. Карасева, Л.Н. Кац и др.// - М.: Медицина, 1971. - 352 с.

2. Бернасовская Е.П. Лептоспироз / Е.П. Бернасовская, Б.Л. Угрюмов, А.Д. Вовк // - К.: Здоровье, 1989. - 151 с.

3. Human leptospirosis: guidance for diagnosis, surveillance and control / WHO, 2003.

4. Таран А.В. Совершенствование методов лабораторной диагностики лептоспироза и детекции его возбудителя: дис. … канд. мед. наук (03.00.07 - микробиология /А.В. Таран; рук. работы И.В. Жарникова. - Ставрополь: ФГУЗ СтавНИПЧИ, 2008. - 150 с.

5. Каршин С.П. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае. Профилактика и методы борьбы / С.П. Каршин, В.В. Бинатова // Ветери нарная служба Ставрополья. - 2008. - №4. - С. 22-26.

6. Каршин С.П. Эпизоотология лептоспироза в Ставропольском крае / С.П. Каршин, В.В. Бинатова, М.Н. Веревкина // Ветеринария. - 2010. - №7 - С. 31-33.

7. Каршин С.П. Ландшафтно-эпозоотологическое районирование Ставропольского края по лептоспирозу / С.П., Каршин, М.Н. Веревкина // Ветеринарная патология. - 2013. - №2 (44) - С.92-96.

8. Каршин С.П. Лептоспироз сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае / С.П. Каршин, М.Н Веревкина // Вестник АПК Ставрополья. - 2015 - №8 - С. 84-86.

9. Методические указания от 03.07.2002 N МУ 3.1.1128-02. - 3.1. Профилактика инфекционных болезней. Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами - М., 2002. - 38 с.

10. Малахов Ю.А. Лептоспироз животных / Ю.А. Малахов, А.Н. Панин, Г.Л. Соболева // - Ярославль: ДИА-пресс, 2001. - 584 с.

11. Бинатова В.В. Совершенствование методов лабораторной диагностики лептоспироза: дисс. … канд. биол. наук (03.00.07 - микробиология, 14.00.30 эпидемиология / В.В. Бинатова; рук. работы И.С. Тюменцева, В.И. Ефременко. - Ставрополь: СтавНИПЧИ, 1999. - 175 с.

12. Warburg O. Isolierung und Kristallisation des Garugsterments Enolase / O. Warburg, W Christian // Biochem. J. 1941. - Vol. 310. - P. 384-421.

13. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gel / O. Ouchterlony // Acta path, microbiol. med. 1949. - Vol. 26. - P. 507-515.

14. Клячко-Гурвич A.A. Методы определения удельной поверхности / A.A. Клячко-Гурвич // Изд-во АН СССР. - 1964. - № 10. - С. 1885.

15. Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники / Н.В. Кельцев // - М: Химия, 1984. - 280 с.

16. Пат. 2198407 Российская Федерация, МПК7 G 01 N 33/531, 33/569. Способ постановки реакции латексной агглютинации / Зайцев А.А., Бинатова В.В., заявитель и патентообладатель Ставроп. науч.- исслед. противоч. ин-т. - №2001104761/13. заявл. 20.02.01, опубл. 27.02.03, Бюл. №6. - 5 с.: ил.

17. Филь А.А. Безопасная диагностика лептоспироза / А.А. Филь, В.В. Бинатова // VII международная экологическая студенческая конференция «Экология России и сопредельных территорий». Сборник научных трудов. - Новосибирск, НГУ. - 2002. - С. 204-207.

18. Бинатова В.В. Конструирование диагностических препаратов для обнаружения лептоспирозных антител в реакции латексной агглютинации / В.В. Бинатова, А.А. Филь // 2-я Всероссийская научнотехническая конференция «Современные достижения биотехнологии». Сборник научных трудов. - Ставрополь, Сев-Кав ГТУ. - 2002. - С. 139-140.

19. Лефковитс И. Иммунологические методы исследований / под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса; пер. с англ. - М.: Мир, 1988. - 530 с.

20. Гармонов И.В. Синтетический каучук / И.В. Гармонов, Е.Г. Эренбург, И.Я. Поддубный и др.; под ред. И.В. Гармонова. - Л.: Госхимиздат, 1983. - 559 с.