SUSPENSION LEPTOSPIRA ANTIGENS DIAGNOSTICUM

The aim of the study was to design an antigen latex diagnostic test to indicate Leptospira antibodies. The authors have obtained the highly active antigen; regime of immobilization of the antigen to the latex. Conditions of slurry agglutination reaction was optimized and laboratory tests of the drug was conducted. For antigenic complexes used six strains of Leptospira serogroups. Antigens were isolated by the scheme comprising X-press and an ultrasonic disintegration with followed by extraction with a non-ionic detergent. In the result was obtained by protein antigens with high concentration (12- 15 mg / ml). The specific activity in the immunodiffusion reaction for different serogroups of Leptospira ranged from 1:32 to 1:64. The structural characteristics of polyacrolein matrix was shown. The specific surface area of the matrix was 35 m2 / g, pore volume was 1.1 cm3 / g, pore radius was 62.8 nm. Immobilization latex particles by polyantigenic was performed. Optimal conditions for sensitization were chosen. Influence of ligand concentration and pH of the reaction mixture was studied in the test suspension agglutination. The source of the antibodies was a mixture of commercial agglutinating rabbit sera against Leptospira serogroups 6. Conditions for suspension agglutination test Improved using a dilution fluid, which provides maximum sensitivity reaction. Optimum reaction pH was 7.0- 7.5. Sensitizing antigen dose was 180 mg / ml. The results showed that the sensitivity of the suspension Leptospira Diagnosticum above standard method in 1.7 times. When using the drug does not require the use of live cultures of Leptospira. This suggests the possibility of using diagnostic kit in human and veterinary medicine as a screening test for leptospirosis.

лептоспироз, антиген, антитело, агглютинация, РМА, РИД, РСА, латекс, полиакролеин, матрица, диагностикум, чувствительность

1. Ананьин В.В. Лептоспирозы людей и животных / В.В. Ананьин, И.Л. Коковин, Е.В. Карасева, Л.Н. Кац и др.// - М.: Медицина, 1971. - 352 с.

2. Бернасовская Е.П. Лептоспироз / Е.П. Бернасовская, Б.Л. Угрюмов, А.Д. Вовк // - К.: Здоровье, 1989. - 151 с.

3. Human leptospirosis: guidance for diagnosis, surveillance and control / WHO, 2003.

4. Таран А.В. Совершенствование методов лабораторной диагностики лептоспироза и детекции его возбудителя: дис. … канд. мед. наук (03.00.07 - микробиология /А.В. Таран; рук. работы И.В. Жарникова. - Ставрополь: ФГУЗ СтавНИПЧИ, 2008. - 150 с.

5. Каршин С.П. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае. Профилактика и методы борьбы / С.П. Каршин, В.В. Бинатова // Ветери нарная служба Ставрополья. - 2008. - №4. - С. 22-26.

6. Каршин С.П. Эпизоотология лептоспироза в Ставропольском крае / С.П. Каршин, В.В. Бинатова, М.Н. Веревкина // Ветеринария. - 2010. - №7 - С. 31-33.

7. Каршин С.П. Ландшафтно-эпозоотологическое районирование Ставропольского края по лептоспирозу / С.П., Каршин, М.Н. Веревкина // Ветеринарная патология. - 2013. - №2 (44) - С.92-96.

8. Каршин С.П. Лептоспироз сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае / С.П. Каршин, М.Н Веревкина // Вестник АПК Ставрополья. - 2015 - №8 - С. 84-86.

9. Методические указания от 03.07.2002 N МУ 3.1.1128-02. - 3.1. Профилактика инфекционных болезней. Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами - М., 2002. - 38 с.

10. Малахов Ю.А. Лептоспироз животных / Ю.А. Малахов, А.Н. Панин, Г.Л. Соболева // - Ярославль: ДИА-пресс, 2001. - 584 с.

11. Бинатова В.В. Совершенствование методов лабораторной диагностики лептоспироза: дисс. … канд. биол. наук (03.00.07 - микробиология, 14.00.30 эпидемиология / В.В. Бинатова; рук. работы И.С. Тюменцева, В.И. Ефременко. - Ставрополь: СтавНИПЧИ, 1999. - 175 с.

12. Warburg O. Isolierung und Kristallisation des Garugsterments Enolase / O. Warburg, W Christian // Biochem. J. 1941. - Vol. 310. - P. 384-421.

13. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gel / O. Ouchterlony // Acta path, microbiol. med. 1949. - Vol. 26. - P. 507-515.

14. Клячко-Гурвич A.A. Методы определения удельной поверхности / A.A. Клячко-Гурвич // Изд-во АН СССР. - 1964. - № 10. - С. 1885.

15. Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники / Н.В. Кельцев // - М: Химия, 1984. - 280 с.

16. Пат. 2198407 Российская Федерация, МПК7 G 01 N 33/531, 33/569. Способ постановки реакции латексной агглютинации / Зайцев А.А., Бинатова В.В., заявитель и патентообладатель Ставроп. науч.- исслед. противоч. ин-т. - №2001104761/13. заявл. 20.02.01, опубл. 27.02.03, Бюл. №6. - 5 с.: ил.

17. Филь А.А. Безопасная диагностика лептоспироза / А.А. Филь, В.В. Бинатова // VII международная экологическая студенческая конференция «Экология России и сопредельных территорий». Сборник научных трудов. - Новосибирск, НГУ. - 2002. - С. 204-207.

18. Бинатова В.В. Конструирование диагностических препаратов для обнаружения лептоспирозных антител в реакции латексной агглютинации / В.В. Бинатова, А.А. Филь // 2-я Всероссийская научнотехническая конференция «Современные достижения биотехнологии». Сборник научных трудов. - Ставрополь, Сев-Кав ГТУ. - 2002. - С. 139-140.

19. Лефковитс И. Иммунологические методы исследований / под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса; пер. с англ. - М.: Мир, 1988. - 530 с.

20. Гармонов И.В. Синтетический каучук / И.В. Гармонов, Е.Г. Эренбург, И.Я. Поддубный и др.; под ред. И.В. Гармонова. - Л.: Госхимиздат, 1983. - 559 с.